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常用上海卢湘仪离心机检验转基因大豆DNA成份的方法

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    实验需求常用实验室仪器设备、卢湘仪高速澳门网站网址(12000r/min)、卢湘仪高速台式离心机(12000r/min)、紫外分光光度计、磁力搅拌器、高压灭菌锅、PCR扩增仪、电泳仪、紫外透射仪、凝胶成像系统或照相系统、重蒸馏水仪。

    样品中DNA的提取——CTAB法将100rag充分粉碎的大豆样品,在液氮中充分研磨成粉末后加400pL冰上预冷的cTAB提取缓冲液I中。加入500txI。65~C预热的CTAB提取缓冲液间不时轻缓颠倒混匀。待冷却至室温后加入储备溶液,室温下放置30rain。加入450gL三氯甲烷+异戊醇,轻缓颠倒混匀溶液。

    将上清液转移至干净的离心管中,依次加600pL异丙醇及60弘L乙酸钠溶液,轻缓颠倒混匀。12000r/min离心10min。,弃上清液后再加入100ffL 70%乙醇洗涤沉淀。12000r/min离心5min,弃上清液。除去残留的乙醇,待沉淀干燥后,DNA沉淀溶解于100ffL TE缓冲液中,一20℃保存备用。

    样品中DNA的提取也可采用商品化基因组提取试剂盒提取。DNA溶液纯度的测定和保存将DNA适当稀释,测定并记录其在260nm和280nm的紫外光吸取率,以一个OD260值相当于50fig/mI.DNA浓度来计算纯化的DNA浓度。要求DNA溶液()D260/()D280值在1.7~2.O。依据测得的浓度将DNA溶液稀释到25~50ng/mI.,一20℃保存。注:由于基因组DNA不宜反复冻融,因此建议对于需要经常使用的DNA需要分装,多管存放,需要使用时取出,融化后应该马上使用,使用结束后,剩余的DNA应在4℃冰箱短期保存,存放时间不宜超过14d。

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